Микроскопия на спори, хифи, цистидии, трама, за идентифициране на гъбички

Съставен микроскоп, подходящ за изследване на гъбички

Информацията по-долу е обобщен извлечение от последната книга на Пат О'Райли „Очаровани от гъби“ . За пълни подробности и примерни страници вижте нашата Книжарница, където можете да поръчате копие, подписано от автора, онлайн ... (Книгата също така съдържа речник на микологичните термини и тук имаме обобщена версия, за да помогнем на начинаещите ...)

Микроскопия и фотомикография

Когато не можете да идентифицирате гъбички на полето, може да искате да носите проба вкъщи за по-нататъшно проучване. Няма смисъл да го правите, освен ако няма нещо, което можете да направите у дома, което не бихте могли да направите на полето. Микроскопското изследване е нещо, което се прави най-добре на закрито, когато имате достатъчно време да направите нещата правилно. Ето няколко съвета за избор и използване на микроскоп за тази цел.

Играчките микроскопи са добре за гледане на животински и растителни структури, но за микологията наистина се нуждаете от добър микроскоп. Това е така, защото фините структури на гъбичките са много малки - някои са близо до границата на това, което може да бъде разрешено с помощта на светлина. Дължините на рентгеновите вълни са много по-къси от тези на светлинните вълни и много повече подробности могат да бъдат изследвани с помощта на рентгенова микроскопия. Но ако смятате, че оптичният микроскоп е скъп инструмент за нещо, което за повечето от нас е просто хоби, дори не обмисляйте да презаредите къщата си за най-нисък рентгенов микроскоп.

Спори на Lactarius azonites
Спори на Lactarius azonites , наблюдавани чрез обектив с микро-потапящ микроскоп

За да изследвате гъбични спори, базидии, цистидии, сфаероцисти и други малки характеристики на гъбичките, ще ви е необходим микроскоп, способен да увеличи поне х 400. В идеалния случай отидете на микроскоп с максимално увеличение от x 1000, но за да получите разумно ясни изображения при толкова голямо увеличение, той трябва да има маслена потапяща леща.

Размерите и орнаментиката (например бодливи брадавици - вижте снимката, вляво) на спорите са ключови идентифициращи характеристики и за да можете да измерите размерите на нещата, които гледате, ще ви трябва окуляр с очен микрометър или някакъв друг средства за калибриране. Ако смятате инструкциите, предоставени с микроскопа, за объркващи (или ако имате късмета да вземете сделка втора ръка без наръчник), някой от вашата местна гъбична група почти със сигурност ще бъде готов да ви помогне да настроите и калибрирате вашия система.

Моят собствен микроскоп е тринокулярен и затова адаптерът на камерата е използваем, дори когато гледам през окулярите. (Голяма част от времето просто наблюдавам изображението, което се прехвърля на екрана на компютъра ми.)

Другите „задължителни“ микроскопски характеристики включват:

  1. Регулируемо осветление, най-често от непосредствено под плъзгача, и наречено осветление с ярко поле. (За биологичните инструменти осветлението на тъмното поле също е отдолу, но под ъгъл, който гарантира, че директната светлина не влиза в целта; той изисква или специален кондензатор на тъмно поле, или, при ниско увеличение, черен ограничител, вмъкнат в пътя на светлината.)
  2. Копчета за управление за преместване на механичния етап, който държи плъзгача
  3. Груби и фини контроли за фокусиране

Оцветяващи химикали

Сфаероцисти в структурата на стъблото на Russula cyanoxantha, горелката на въглища
Сфаероцистите в структурата на стъблото на Russula cyanoxantha , горска гъба, известна като Charcoal Burner, са отговорни за нейната чупливост. Тази снимка е направена чрез микроскоп с увеличение x600. Материалът на стъблото на пързалката е оцветен с конго червено.

Фината структура на спорите и много от другите малки части от гъбички, които ще искате да разгледате под микроскопа, са почти напълно полупрозрачни. Те могат да се видят ясно само когато са оцветени. Като допълнителна помощ за идентифициране много гъби произвеждат спори, които променят цвета си при контакт с определени химикали, наричани реактиви (поради реакцията, когато спорите влизат в контакт с тях). Ето някои от химикалите, петна и реагенти, най-често използвани в микологичната микроскопия:

Дестилирана вода

(Да, добрият стар H2O!) Ако искате да видите малки обекти и да видите естествените им цветове, водата е идеалното овлажняващо средство. Чешмяната вода съдържа химически добавки, които могат да ограничат живота на пързалката, а дъждовната вода е кисела и също толкова проблематична, но дестилираната вода е евтина и лесно достъпна. Може да се наложи да добавите капка фотографски овлажняващ агент, за да избегнете изкривяване на изображението поради малки въздушни мехурчета, прикрепени към спори или друг предмет. (Течността за миене работи!) Добавянето на около 10% глицерин ще гарантира, че пързалките издържат много по-дълго, преди да изсъхнат.

Амоняк (NH3)

Този полезен, но потенциално опасен химикал отделя изключително остра пара и затова бутилката трябва да бъде сигурно запушена през цялото време, освен по време на употреба. (Домакинският амоняк от всеки железарски магазин е добре.) Освен реагент, който причинява промяна на цвета на някои видове гъби, амонякът е компонент на някои други реактиви. Чистият амоняк е газ при нормална стайна температура, а за микологична употреба 10% разтвор в дестилирана вода е нормалната концентрация. Това е силно и ако попадне в очите, ще причини сериозни щети.

Железен сулфат (FeSO4)

Много любители на гъбички и миколози носят в полевия си комплект кристал от железен сулфат, известен в разговорно наименование Железни соли, за триене върху гъбички (в частност крехки хриле), за да се провери цветната реакция. Не отивайте за сметка на закупуването на кристали от фармацевтичен клас; нещата, които се продават в градинските центрове като убиец на мъх и за понижаване на алкалността на почвата, са евтини мръсотия (опа!) и работят също толкова добре.

Калиев хидроксид (KOH)

Това се използва както като монтажна среда (обикновено заедно с оцветяващ химикал), така и като реагент, или в полето, или обратно в основата. Покривните или хрилни повърхности на някои гъби драстично променят цвета си при контакт с KOH; те могат да станат жълти, червени, пурпурни, маслинови или черни, например, в зависимост от вида. Така че, когато правите предметно стъкло с микроскоп, използвайки KOH, то не само е запазено срещу разпадане, но може да предизвикате и диагностична цветна реакция, която понякога може да допринесе толкова много за процеса на идентификация, колкото данните за размера и формата, получени чрез микроскопа.

Реактивът на Мелцер

Този коктейл от химикали е трудно да се получи, тъй като един от най-важните компоненти е потенциално опасното вещество хлоралхидрат (лекарство за изнасилване с фурма). Другите компоненти се придобиват лесно - йодни кристали, калиев йодид и дестилирана вода. Йодът реагира с нишестени вещества, за да произведе интензивен синьо-черен цвят, а спорите на гъбички, които съдържат нишесте, се наричат ​​„амилоид“. Ако се присъедините към група за гъбички в Обединеното кралство, може да успеете да получите реагента на Melzer чрез Асоциацията на британските гъбични групи (ABFG). Спорите от гъбични видове могат да претърпят диагностични промени в цвета, когато са оцветени с реагента на Мелцер. Спорите се наричат:

  1. Амилоид, ако придобият синьо-черен цвят.
  2. Декстриноид, ако придобият червеникаво-кафяв цвят.
  3. Инамилоиди (или отрицателни), ако те просто станат жълтеникави или изобщо не се променят.

Тези термини се използват в полеви справочници, в които са изброени химичните тестови знаци за всеки вид.

Петна

Asci от Poronia punctata
Asci от Poronia punctata , гъбички по ноктите

Основните причини за използването на петна при направата на микроскопски плъзгачи са:

  1. подобрете контраста в микроскопично изображение
  2. подчертават определени тъканни структури

Често петна се използват заедно с други химикали, които помагат за предотвратяване на гниене или изсъхване на предмета.

Примерите за оцветяващи агенти включват:

Конго червено

Отлично петно ​​с общо предназначение за разглеждане на фините детайли на хифални структури (например вижте снимката на Amanita rubescens gill trama, вдясно, където маркираните размери са в микрони.) Предлага се под формата на прах и е най-добре да се разтвори в 10% амонячен разтвор.

Сафранин

Друго петно, което произвежда ядра на червените клетки.

Лактофенол памучно синьо

Това оцветява хитин, което прави такива структури като орнаменти на спори да се показват много по-ясно, отколкото при повечето други петна (включително конго червено).

Изстрел за раздяла - добре, този е по-скоро свързан с избягването на заминаването. Посочените по-горе химикали включват някои сериозно разяждащи, киселинни и токсични вещества и затова те наистина трябва да се съхраняват там, където децата не могат да се доберат до тях. Изпаренията от амоняк например могат да изгорят очите - всъщност някои тестове просто изискват амонячна пара да премине през гъбичната тъкан, за да предизвика промяна в цвета.

Тринокулярен микроскоп

Сигурен сейф може да спаси живот. Имам един, прикрепен към стената до пейката, където държа микроскопа си (вижте снимката по-горе), и е идеален за съхранение на химикали, бръсначи, стъклени плъзгачи и т.н.

Спори

Отгоре: спори от портокалова кора Fungus Aleuria aurantia

Правене на слайдове

Най-лесните слайдове за правене са от спори. (Тук са показани спори от Agaricus bisporus , търговската гъба с бутони, която винаги се предлага в хранителни магазини и супермаркети.) Всичко, което трябва да направите, е да поставите гъбичките с плодородна страна надолу върху микроскоп и да изчакате час-два.

За разлика от това, когато се опитвате да направите хубав отпечатък от спори, дори не е нужно да покривате всичко, макар че обикновено го правя само като напомняне, че отдолу има парче стъкло с остри ръбове. Тъй като искате да можете да виждате отделни спори, вместо да определяте цвета на спорите, когато се натрупват слой върху слой, не се нуждаете от плътен печат и затова не трябва да го оставяте твърде дълго.

След като на пързалката има малко спорен прах, добавете капка омокрящ агент (сапунена вода!) Или подходящо петно, ако спорите са по-прозрачни, а не оцветени, и поставете капак отгоре. Реактивът на Мелцер е добър избор, защото едновременно с подобряването на контраста, ако държите плъзгача нагоре към светлината, ще можете да видите дали спорите са амилоидни, декстриноидни или инамилоидни - от които по-късно ....

Слайд - 1

Правенето на слайдове от много тънки парчета гъбична тъкан е по-трудно и трябва да очаквате повече неуспехи, отколкото успехи. Трудността е да се създаде наистина тънък и равномерен парче, което съдържа функциите, които искате да изучите. На хрилете на агарикоиден вид бихте могли да пожелаете да изучите базидиите - (обикновено) бичковидни удължения с форма на клуб, върху които се носят стеригмати и спори.

След като сте отрязали тънък парченце с помощта на остър бръснач или откъснали лента с помощта на чифт пинсети с иглени носове, процесът е същият като при споровите слайдове. Поставете образеца върху предметно стъкло, добавете няколко капки петно ​​и след това покритие, като леко натискате, за да изравните участъка. Бъдете внимателни: повечето покривки са с дебелина малко повече от една десета от милиметъра и се чупят много лесно. Отстранете излишното петно ​​с помощта на абсорбираща тъкан и след това изчакайте няколко минути, докато петното проникне в образеца.

Слайд - 2

Вариация на този подход - доста по-лесна, но по-скоро техника на удряне и пропускане - е да смачкате доста тънък образец между два слайда - с късмет битовете, които ви интересуват, ще изхвърлят в един от ръбовете. Използвайте петно, както преди, за да подчертаете тези елементи на ръба.

Когато изучавате базидиомицети под микроскоп, не сте ограничени до размера и формите на спорите. Можете също така да изследвате различни видове цистидии. Това са хифални структури, които се открояват от различни повърхности. В зависимост от това къде се срещат, те получават различно име: плевроцистидиите се появяват по хрилните повърхности, хейлоцистидиите са тези по хрилните ръбове, пилеоцистидиите се появяват на повърхността на капачката, а каулоцистидиите са тези, открити на стъблото на гъбата. Формите на цистидии във всяко от тези местоположения могат да бъдат различни и тези разлики могат да ви помогнат, е ... да правите разлика между видовете.

Хрилна трама на Hygrocybe chlorophana

Показаната по-горе микрофотография е на хрилна трама от Hygrocybe chlorophana , Златната восъчна шапка. Не всички восъчни капачки могат да бъдат идентифицирани на ниво вид чрез изследване на макроскопични знаци. Някои се определят най-добре чрез изследването им под микроскоп, докато някои се нуждаят както от макроскопско, така и от микроскопско изследване. Смачкването на малко парче хрилен материал (хрилна трама) между предметното стъкло и покривката ви позволява да изучите структурата на тъканта. Някои имат вплетени хифи; някои са правилни (хифи, разположени успоредно една на друга), а други са подредовни (някъде между двете). Дългите клетки на Hygrocybe chlorophana са ясно видими тук, докато хифалните клетки на например Hygrocybe miniata , Vermillion Waxcap) са много по-къси.

Софтуер, който прави фотографията с микроскоп по-малка мизерия

Ако някога сте се опитвали да направите снимка на спори или други парчета гъбична тъкан под микроскоп, ще разберете колко е трудно да се фокусира всичко. Получавате една част остра, а останалата част е размазана. Проблемът е причинен от много ограничената дълбочина на рязкост, налична при голямо увеличение. Специалист, но евтин софтуер може да ви помогне. Взимате няколко изображения, фокусиращи се на различни дълбочини, в тъканната проба и софтуерът създава картина, използвайки фокусираните части на различните ви изображения. Измерването на спори на гъбички е много по-лесно с програма, наречена Mycocam4. Произведен от миколога Ричард Шотболт, той се предлага като безплатно изтегляне от www.shotbolt.com - и е много лесен за използване.

Микроскопията е специализиран предмет, а не нещо, в което всеки, който се интересува от гъбички, иска да се включи. За много повече информация по този въпрос има специализирани текстове, а за помощ при избора и настройката на микроскоп - уебсайтовете на надеждни независими доставчици като Brunel Микроскопите са добра отправна точка. Обикновено е възможно да организирате посещение, за да обсъдите вашите специфични нужди и да изпробвате няколко алтернативи.

Примери

На много от нашите страници с видове гъбички ще видите примери за спорови снимки, направени с помощта на микроскоп с приставка за цифрова камера. Например вижте Laccaria bicolor , която има интересни орнаменти от спори; и Cuphophyllus pratensis , който има елипсоидни или сълзовидни до субглобозни спори.


Ако сметнете тази информация за полезна, сигурни сме, че и нашата книга Fascinated by Fungi от Pat O'Reilly ще ви бъде много полезна. Тук са достъпни подписани от автора копия с твърди корици на специална отстъпка ...

Други книги за природата от First Nature ...